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紫外可见分光光度计波长准确度和应用范围

日期:2021-01-17 08:20
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摘要: 紫外可见分光光度计波长准确度和应用范围 波长重复性是指波长的实际测定值与理论值的差,是分光光度计的重要技术指标,特别是在对多台仪器的测试结果进行比较时波长显得格外重要,如果仪器的波长准确度不好,就无法进行比较或比较不出正确的结果。因为对同一物质,在不同波长测试时,由于不同波长时摩尔吸光系数不同,就会有不同的灵敏度,即使是同一样品,测试的数据也不会相同。目前国内很多厂家,都采用氧化钬玻璃或钬溶液对仪器的多个波长点(有:241nm、279.4nm、333.7nm、360.9nm、418.7nm、536.2)等十一个点进行检测。但...
紫外可见分光光度计波长准确度和应用范围
波长重复性是指波长的实际测定值与理论值的差,是分光光度计的重要技术指标,特别是在对多台仪器的测试结果进行比较时波长显得格外重要,如果仪器的波长准确度不好,就无法进行比较或比较不出正确的结果。因为对同一物质,在不同波长测试时,由于不同波长时摩尔吸光系数不同,就会有不同的灵敏度,即使是同一样品,测试的数据也不会相同。目前国内很多厂家,都采用氧化钬玻璃或钬溶液对仪器的多个波长点(有:241nm、279.4nm、333.7nm、360.9nm、418.7nm、536.2)等十一个点进行检测。但是检测某台仪器的波长准确度是有很多种方法的,在此不作详细介绍。
引起波长的不准确,主要有:仪器的本身变形,给光栅的传动结构带来了影响,从而影响波长的准确度;光栅传动结构的精度,这对波长准确度具有决定性的作用,国内目前多数采用丝杆、扇形齿轮以及电机直接带动等,这其中丝杆结构基本上能让波长准确度做到±0.5nm,电机直接带动结构一般能够做到±1.5nm,扇形齿轮结构一般能够做到±2nm,所以丝杆结构相对较好,目前也有很少一部分厂商采用扇形齿轮加丝杆来进行传动,当然这种结构的波长准确度会更高一些。当然也有一些其它因素能直接影响到仪器的波长准确度,例如长年不重新鉴定、电机用的不好等等都会影响到波长准确度。
(1)定量分析
根据琅伯-比尔定律,样品的浓度和吸光度是成正比关系的,浓度越大,吸收值越高,所以分光光度计用的*多的还是定量分析,定量分析的种类有很多,这里介绍常用的几种定量分析方法:
A、**法:**法是紫外可见分光光度计诸多分析方法中使用*多的一种方法。这是一种以琅伯-比尔定律A=εbC为基础的分析方法,某一物质在一定波长下ε值是一个常数,石英比色皿的光程是已知的,也是一个常数。因此,可用紫外可见分光光度计在λmax波长处,测定样品溶液的吸光度值A。然后,根据琅伯比尔定律求出C=A/εb,则可求出该样品溶液的含量或浓度。
B、标准法:在选定的波长处,在相同的测试条件下,分别测试标准样品溶液C标和被测试样品溶液C样的吸光度A标和A样。然后,按下式求得样品溶液的浓度或含量。
C样=A样/A标×C标
C、标准曲线法
紫外可见分光光度计*常用的定量分析方法是标准曲线法。即先用标准物质配制一定浓度的溶液,再将该溶液配制成一系列的标准溶液。在一定波长下,测试每个标准溶液的吸光度,以吸光度值为纵坐标,标准溶液对应得浓度为横坐标,绘制标准曲线。**,将样品溶液按标准曲线绘制程序测得吸光度值,在标准曲线上查出样品溶液对应的浓度或含量。
(2)定性分析
如果未知物的紫外吸收光谱的**吸收峰波长λmax、*小吸收峰波长λmin、**摩尔吸光系数εmax,以及吸收峰的数目、位置、拐点与标准光谱数据完全一致,就可以认为是同一种化合物。定性分析的主要目的是知道分析样品中是什么物质。
定量分析和定性分析是分光光度计的两大主要功能,特别是定量分析。其它的分析都应该是从这两大种功能中发展出来的。
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